Sephadex - Sephadex
Sephadex ist ein vernetztes Dextran- Gel, das zur Gelfiltration verwendet wird . Es wurde 1959 von Pharmacia nach Entwicklungsarbeiten von Jerker Porath und Per Flodin auf den Markt gebracht . Der Name leitet sich von se reitung Pha rmacia dex tran. Es wird normalerweise in Perlenform hergestellt und am häufigsten für Gelfiltrationssäulen verwendet . Durch Variation des Vernetzungsgrades können die Fraktionierungseigenschaften des Gels verändert werden.
Diese hochspezialisierten Gelfiltrations- und Chromatographiemedien bestehen aus makroskopischen Kügelchen, die synthetisch aus dem Polysaccharid Dextran gewonnen werden. Die organischen Ketten sind vernetzt, um ein dreidimensionales Netzwerk mit funktionellen ionischen Gruppen zu ergeben, die durch Etherbindungen an Glucoseeinheiten der Polysaccharidketten gebunden sind.
Verfügbare Formen umfassen Anionen- und Kationenaustauscher sowie Gelfiltrationsharze mit unterschiedlichen Porositätsgraden; Perlengrößen fallen in diskrete Bereiche zwischen 20 und 300 µm .
Sephadex wird auch für die Ionenaustauschchromatographie verwendet.
Anwendungen
Sephadex wird verwendet, um Moleküle nach Molekulargewicht zu trennen. Sephadex ist eine schnellere Alternative zur Dialyse (Entsalzung), die einen niedrigen Verdünnungsfaktor (nur 1,4:1) mit hohen Aktivitätsrückgewinnungen erfordert. Sephadex wird auch für den Pufferaustausch und die Entfernung kleiner Moleküle bei der Herstellung großer Biomoleküle wie Ampholyte, Detergenzien, radioaktive oder fluoreszierende Markierungen und Phenol (während der DNA-Reinigung) verwendet.
Eine spezielle hydroxypropylierte Form von Sephadex-Harz namens Sephadex LH-20 wird zur Trennung und Reinigung kleiner organischer Moleküle wie Steroide, Terpenoide und Lipide verwendet. Ein Anwendungsbeispiel ist die Reinigung von Cholesterin.
Fraktionierung
Ausschlusschromatographie.
Fraktionierungsbereich von globulären Proteinen und Dextranen (Da).
| Geltyp | Fraktionierungsbereich | |
|---|---|---|
| Kugelförmig
Proteine |
Dextrans | |
| G-10 | 700 | 700 |
| G-15 | 1500 | 1500 |
| G-25 | 1000–5000 | 100–5.000 |
| G-50 | 1500–30.000 | 500–10.000 |
| G-75 | 3000–80.000 | 1000–50.000 |
| G-75 SF | 3000–70.000 | 1000–50.000 |
| G-100 | 4000–150.000 | 1000–100.000 |
| G-100 SF | 4000–100,000 | 1000–100.000 |
| G-150 | 5000–300.000 | 1000–150.000 |
| G-150 SF | 5000–150.000 | 1000–150.000 |
| G-200 | 5000–600.000 | 1000–200.000 |
| G-200 SF | 5000–250.000 | 1000–200.000 |
Ionenaustauschchromatographie.
| Beschreibung | Funktionalität | Perlengröße (µ) |
|---|---|---|
| Sephadex-CM C-25 | Carboxymethyl | 40-120 |
| Sephadex-CM C-50 | Carboxymethyl | 40-120 |
| Sephadex-DEAE A-25 | 2-(Diethylamino)ethyl | 40-120 |
| Sephadex-DEAE A-50 | 2-(Diethylamino)ethyl | 40-120 |
| Sephadex-QAE A-25 | quartäres Aminoethyl | 40-120 |
| Sephadex-QAE A-50 | quartäres Aminoethyl | 40-120 |
| Sephadex-SP C-25 | Sulfopropyl | 40-120 |
| Sephadex-SP C-50 | Sulfopropyl | 40-120 |